羧酸鹽結(jié)構(gòu)分析-脂肪酰化縮多氨基酸鹽

脂肪酰化縮多氨基酸鈉(雷米邦A)結(jié)構(gòu)式如下：

RCO(NHCH₂CO)nNHCH₂COONa

分解蛋白質(zhì)的肽，聚合度為2～5，作為表面活性劑時(shí)，其平衡性認(rèn)為是很好的。因此，將蛋白質(zhì)水解至適當(dāng)?shù)哪栙|(zhì)量，再與脂肪酸氯化物反應(yīng)。

此外，還包含有如谷氨酸、天冬氨酸、丙氨酸那樣的單氨基酸和脂肪酸氯化物反應(yīng)物(類似于表面活性劑)。

(一)定性試驗(yàn)

1.試管試驗(yàn)

試樣溶解在水中呈堿性，變酚酞為紅色。醇溶液中呈中性。

2.縮二脲反應(yīng)

加50～lOOmg(1～3滴)試樣于lml水中，加5滴KOH溶液(450g／L)，充分混合。加熱煮沸，冷卻后，加入2滴硫酸銅溶液(50g／L)。顯藍(lán)紫色～紫紅色表示存在蛋白質(zhì)、聚肽(三肽以上)、β一羥基氨(單乙醇胺等)。這種顏色可能是由于鍵的氮和銅發(fā)生螯合的結(jié)果。

3.(水合)茚滿三酮反應(yīng)

在1～2ml試樣水溶液中加入lml吡啶，lml抗壞血酸溶液(0.5g／L)和lml水合茚三酮溶液(10g/L)，在沸水浴上加熱25min，冷卻后，劇烈振蕩，紅色消失呈紫色。由于存在端位游離α一氨基，因而α一氨基酸、伯氨、氨也顯色。

4.IR光譜檢定

從結(jié)構(gòu)上考慮，存在著羧基離子和酰氨基的特征吸收。羧基離子在1600～1550cm^-1出現(xiàn)C—O非對(duì)稱伸縮振動(dòng)，在1430～1410cm^-1附近出現(xiàn)C=0的對(duì)稱伸縮振動(dòng)的吸收，酰氨基在1570～1515cm^-1的NH變角振動(dòng)和C—N伸縮振動(dòng)與在1680-1630cm^-1的C=O伸縮振動(dòng)呈聯(lián)合吸收，而這些吸收帶相互接近，由于重疊，所以難以明確檢定(圖1)。

圖1蛋白分解氨基酸一脂肪酸縮合物的紅外吸收光譜(薄膜法)

若只有羧基(將試樣轉(zhuǎn)換成酸的形式)，因?yàn)槲找浦?SPAN lang=EN-US>l700cm^-1附近，可以確認(rèn)出來。

5.薄層色譜檢定

(1)薄層Kieselgel F一254(Merck公司制)，厚0.25mm。

(2)展開溶劑正丁醇一醋酸.水(4：1：2，體積分?jǐn)?shù))以及水飽和正丁醇。

(3)顯色方法  將已展開之薄層干燥，在由漂白粉和濃鹽酸發(fā)生的氯霧氣中進(jìn)行N一氯化。再吹進(jìn)冷風(fēng)以揮發(fā)吸附的氯，輕輕地噴霧乙醇，干燥1～2min，噴霧碘化鉀淀粉液。含有NH基的表面活性劑生成紫色斑點(diǎn)。現(xiàn)將上述條件下展開的R_f列于表2中。

表2 N-酰化氨基酸鹽的Rf值和發(fā)色度

①三乙醇胺的斑點(diǎn)。

②展開溶劑(A)  正丁醇-醋酸一水(4：1：2，V／V)。

③展開溶劑(B)  水飽和正丁醇。

④發(fā)色度M～中等程度的發(fā)色；W一弱的發(fā)色；VW一非常弱的發(fā)色；N一沒有發(fā)色。

對(duì)于N-長鏈酰化谷氨酸，即使氨基的鏈長以及反離子不同，R_f值幾乎不變。隨著氨基酸的不同，可以看出R_f值的變化，檢出極限約0.5μg。

(二)結(jié)構(gòu)分析

1.親油基的分析

將約2g的試樣和50ml鹽酸(1+1)一起煮沸6h以上。冷卻，加入等量的乙醇(95％)，每次用50ml石油醚萃取3～4次。合并石油醚，充分水洗至甲基橙指示劑呈中性。加入無水硫酸鈉脫水，過濾，在熱水浴上蒸餾回收石油醚，得到脂肪酸。

將這樣得到的脂肪酸按脂肪酸鹽結(jié)構(gòu)分析中敘述的甲酯化方法甲酯化，然后按相同的條件作氣相色譜分析。

2.親水基的分析

(1)水解  為了分析親水基，必須破壞氨基酸，在水解肽鍵時(shí)，用相當(dāng)于試樣100～150倍的鹽酸溶液[c(HCl)=6mol／L]，在110℃的封閉管中，或者在裝有回流冷凝器的燒瓶中在135～140℃的油浴中加熱20h，分解產(chǎn)物經(jīng)萃取除去脂肪酸后，濃縮除去鹽酸。

(2)用氣相色譜分離定量  得到的氨基酸混合物用離子交換色譜，紙色譜，或者氣相色譜分離定量，在進(jìn)行氣相色譜操作中，作了將氨基酸變成揮發(fā)性衍生物的必要性的種種考察。圖3表示氨基酸的N-三甲基硅-三甲基硅醚衍生物的氣相色譜。用玻璃層析柱硅系固定相分析。

圖3 氨基酸的N-三甲基硅-三甲基硅醚衍生物的氣相色譜1一丙氨酸；2一甘氨酸；

3一纈氨酸；4一亮氨酸；5一異亮氨酸；6一谷氨酸；7一苯基丙氨酸層析柱 

硅油(30％)／Sterehamol(紅色耐火磚載體，德國SW產(chǎn))(2.8m)。溫度l65℃。