洗潔精對(duì)人皮膚纖維細(xì)胞損傷刺激的研究

洗潔精對(duì)人皮膚纖維細(xì)胞損傷刺激的研究

李梅¹，郭洪砷¹，黃曉明¹，張進(jìn)²

(1．安利(中國(guó))研發(fā)中心，上海200021;2．復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院，上海200032)

摘要：借助人體皮膚纖維細(xì)胞損傷刺激實(shí)驗(yàn)，通過(guò)MTT顯色圖和細(xì)胞結(jié)晶紫染色圖分析了洗潔精對(duì)人體皮膚的影響。

關(guān)鍵詞：洗潔精；皮膚；刺激性；人皮膚成纖維

中圖分類號(hào)：TQ649    文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A    文章編號(hào)：1006-7264( 2010)11-0029-02

洗潔精為日常消費(fèi)用品。安利公司生產(chǎn)的濃縮型洗潔精是一種高效的去污和去油產(chǎn)品。它可以應(yīng)用于所有餐具以及水果蔬菜的清洗，專利的“三元洗滌系統(tǒng)”（融合3種特殊的表面活性劑，迅速溶解頑固污垢）使其溶解污垢的效果奇佳。作為一種生活中常用的消費(fèi)品，洗潔精的使用安全性也是大家關(guān)注的問(wèn)題之一。安利濃縮型洗潔精含有蘆薈和椰子油衍生物，性質(zhì)溫和，使用中可起到保護(hù)雙手的功效。本實(shí)驗(yàn)將以人體皮膚成纖維細(xì)胞作為模型，對(duì)比分析安利濃縮型洗潔精對(duì)皮膚的影響。

1實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1材料

人皮膚成纖維細(xì)胞為原代培養(yǎng)細(xì)胞，上海肯強(qiáng)儀器有限公司；MTT [3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽]，sigma公司；其他試劑均國(guó)產(chǎn)。

1.2人皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)

早代人皮膚成纖維細(xì)胞，上海肯強(qiáng)儀器有限公司；5％（體積分?jǐn)?shù)）CO₂培養(yǎng)，培養(yǎng)基為含有10％（體積分?jǐn)?shù)）胎牛血清的高糖DMEM(購(gòu)自Gibco)；傳代消化使用0.1％胰酶。

1.3對(duì)人皮膚成纖維細(xì)胞的刺激

使用安利公司的濃縮型洗潔精以及其他公司同類產(chǎn)品B和D，以刺激體積分?jǐn)?shù)為0.200％為基準(zhǔn)，按照同等去污力原則稀釋安利濃縮洗潔精，得到4個(gè)不同濃度樣品(Al，A2，A3和A4)。將早代人皮膚成纖維消化后傳于96孔板中(每孔5.0×l04個(gè)細(xì)胞，第2天細(xì)胞密度約為80％)。吸棄培液后，分別加入各濃度洗潔精稀釋液100μL，作用5min后，吸棄稀釋液，加入100μL DMEM完全培液，24 h后測(cè)定MTT值。或使用各稀釋液作用12 h后，直接鏡下或結(jié)晶紫染色后觀測(cè)細(xì)胞形態(tài)。

1.4 MTT檢測(cè)

每孔(含有100μL DMEM)加入10μL MTT反應(yīng)液(質(zhì)量濃度為5g／L，溶于磷酸鹽緩沖液PBS)，置于CO₂培養(yǎng)箱中，4h后棄培液，加入100μL DMSO（二甲基亞砜），避光溫和搖動(dòng)20 min后，使用Spectra Max M5多功能酶標(biāo)儀測(cè)OD490吸光值。

1.5結(jié)晶紫染色

吸棄培液，PBS洗一遍，冰上甲醇固定2 min，加入質(zhì)量濃度為0.2 g／L的結(jié)晶紫染液固定細(xì)胞15 min，吸棄染液，用蒸餾水洗細(xì)胞3次，可見(jiàn)光下觀察細(xì)胞狀態(tài)。

2試驗(yàn)結(jié)果及討論

各稀釋液短時(shí)間作用于人皮膚成纖維細(xì)胞5 min，24 h后使用MTT檢測(cè)細(xì)胞（見(jiàn)圖1），以分析短時(shí)間作用，對(duì)皮膚成纖維細(xì)胞活力的影響。對(duì)細(xì)胞存活率的檢測(cè)結(jié)果顯示，與同類產(chǎn)品B和D對(duì)比，安利濃縮洗潔精同等去污力樣品，對(duì)細(xì)胞活力的影響明顯弱很多。這表明，與其他品牌洗滌劑相比，在同等去污力并短時(shí)間刺激條件下，安利洗潔精對(duì)皮膚成纖維細(xì)胞的損失明顯弱很多。其中，稀釋液A4樣品幾乎對(duì)細(xì)胞無(wú)損傷（圖2）。

為了分析較長(zhǎng)時(shí)間對(duì)皮膚成纖維細(xì)胞的作用，試驗(yàn)分別使用各稀釋液較長(zhǎng)時(shí)間作用于細(xì)胞12 h。作用后發(fā)現(xiàn)，同類產(chǎn)品引起皮膚成纖維細(xì)胞大面積死亡（見(jiàn)圖3）。

進(jìn)一步細(xì)胞結(jié)晶紫染色顯示相同結(jié)果（見(jiàn)圖4）。洗潔精是日常用品，在對(duì)高效去污去垢效能的同時(shí)，其對(duì)皮膚的刺激性也為廣大消費(fèi)者所關(guān)心。為此，對(duì)比其他同類產(chǎn)品，檢測(cè)了安利濃縮洗潔精在短時(shí)間和長(zhǎng)時(shí)間兩種作用方式下，對(duì)皮膚成纖維細(xì)胞的影響。

結(jié)果顯示，在同等去污能力下，安利濃縮洗潔精對(duì)皮膚成纖維細(xì)胞的影響明顯小于其他同類產(chǎn)品。而在較長(zhǎng)時(shí)間的作用下，安利濃縮洗潔精對(duì)皮膚成纖維細(xì)胞的低損傷作用進(jìn)一步顯示出來(lái)，例如安利洗潔精A3稀釋液長(zhǎng)時(shí)間對(duì)細(xì)胞幾乎沒(méi)有損傷作用。